水相流動(dòng)相的使用，是采用反相色譜法進(jìn)行離子化合物分析檢測的關(guān)鍵步驟：包括pH值對分析物保留的影響、緩沖鹽的類型與濃度、緩沖鹽在有機(jī)溶劑中的溶解度及其對檢測的影響等。緩沖鹽種類、離子強(qiáng)度和pH值等選擇不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致對極性化合物和可電離化合物進(jìn)行反相分離時(shí)，存在不良或不可重現(xiàn)的保留和拖尾現(xiàn)象。

分析物部分離子化，分析物與固定相自由硅醇基和其他活性位點(diǎn)之間較強(qiáng)的作用力等問題，可通過選擇合適的緩沖范圍、正確的緩沖鹽種類及其濃度（離子強(qiáng)度）來改善。靈敏的LC-MS分析，更加注重酸、堿、緩沖鹽種類和其他添加劑的選擇：緩沖液不能抑制分析物的電離。

反相模式中，離子化合物的保留主要由流動(dòng)相pH值來決定。離子官能團(tuán)的解離性能同樣影響化合物的保留。非離子化合物的保留幾乎不受流動(dòng)相pH值的影響。對于含酸性基團(tuán)的化合物（羧酸鹽居多），pH值低于化合物pKa可增強(qiáng)保留，對于含堿性基團(tuán)的化合物（胺類居多），pH值高于化合物pKa可增強(qiáng)保留。

在pH值離pka較遠(yuǎn)的位置，較小的pH值變化對非質(zhì)子-質(zhì)子種類的比例影響很小。因此，中等pH值變化不會(huì)對保留產(chǎn)生明顯影響。pKa附近pH值的微小變化，會(huì)對兩種物質(zhì)的比例產(chǎn)生明顯的影響。因此，改變接近pKa的pH值，會(huì)明顯影響化合物的保留。當(dāng)pH值作為增加化合物保留的手段時(shí)，考慮方向應(yīng)該是盡量降低分析物的離子化。緩沖液是弱酸與其共軛堿，或弱堿與其共軛酸的溶液。

緩沖液降低氫離子、水合氫離子和氫氧根離子的影響，從而較少包括稀釋在內(nèi)的pH值波動(dòng)。反相模式下，經(jīng)典的硅膠基質(zhì)填料的pH值耐受范圍是2-8。緩沖液的選擇通常由所需的pH值決定。緩沖液的pKa必須接近所需的pH值，因其在pKa處最容易控制pH值。經(jīng)驗(yàn)法則是選擇一個(gè)pKa值<2個(gè)單位的所需流動(dòng)相pH的緩沖液。

緩沖鹽應(yīng)用一般思路