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實(shí)驗(yàn)技巧 | 揮發(fā)性或粘度高的試劑,流動(dòng)相配置需注意

更新時(shí)間:2023-08-10 點(diǎn)擊次數(shù):1246

流動(dòng)相是高效液相檢測(cè)中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié),其操作的合規(guī)性準(zhǔn)確性直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性。在日常檢測(cè)中,我們經(jīng)常會(huì)遇到流動(dòng)相含有揮發(fā)性試劑(如三氟yi酸(TFA)、三乙胺、濃氨等)的情況;也會(huì)遇到含粘度較高的組分(如磷酸等)。這些組分在流動(dòng)相配置時(shí),其添加方法需要特別注意,以免因試劑揮發(fā)或放液不wan全而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。


三乙胺是液相流動(dòng)相中常用的一種組分,起到調(diào)節(jié)pH,屏蔽固定相上的硅羥基從而修飾峰形,改善峰拖尾等作用。同時(shí)它也是一種揮發(fā)性試劑,如按常規(guī)方法,在液面以上放液,就會(huì)出現(xiàn)因三乙胺揮發(fā)導(dǎo)致的流動(dòng)相配置不準(zhǔn)確的情況,因此在添加三乙胺等揮發(fā)性試劑時(shí),建議選用量入式移液管,伸至液面以下再放液。

示例


某項(xiàng)目,流動(dòng)相為:15mmol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.06%三乙胺和0.14%磷酸)

流動(dòng)相配置一:常規(guī)配置方法,三乙胺在液面以上放液,配置流動(dòng)相。


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通過以上兩圖對(duì)比可發(fā)現(xiàn),不同的流動(dòng)相配置操作,會(huì)導(dǎo)致出峰時(shí)間的明顯變化。



結(jié)論


配置流動(dòng)相時(shí),要按不同試劑的特性選擇合適的配制方法,不能一概而論。

1)對(duì)于揮發(fā)性試劑,如三乙胺,二乙胺,三氟yi酸,七氟丁酸等,添加時(shí),為避免揮發(fā)導(dǎo)致濃度差異,配置時(shí)將移液管插入到液面以下再放液。

2)對(duì)于粘稠試劑,如磷酸,量取時(shí)要盡量慢,吸取完畢后用紙巾擦拭管口周圍,避免試劑附著在管口,影響添加試劑的濃度。添加時(shí),要注意放緩放液速度,以避免因放液過快,部分試劑還附著在移液管壁沒有流下,導(dǎo)致流動(dòng)相的濃度差異。


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